Universität zu Köln

Cloning and characterization of Enaptin, a novel giant actin-binding protein connecting the nucleus to the actin cytoskeleton

Abraham, Sabu (2004) Cloning and characterization of Enaptin, a novel giant actin-binding protein connecting the nucleus to the actin cytoskeleton. PhD thesis, Universität zu Köln.

[img]
Preview
PDF
Download (7Mb) | Preview

    Abstract

    Summary ----------------------------------------------------------------------- The a-actinin superfamily is the largest of the F-actin cross-linking protein families Members of this superfamily have an actin-binding domain (ABD) consisting of a pair of calponin homology domains. We have cloned and characterized a novel giant actin-binding protein called Enaptin, which belongs to this family. Together with NUANCE, Enaptin forms a group of giant proteins that associate with the F-actin cytoskeleton as well as the nuclear membrane. Enaptin is composed of an N-terminal a-actinin type ABD, followed by a long coiled-coil rod and a transmembrane domain at the C-terminus. We have cloned and assembled a cDNA for Enaptin and found that the longest open reading frame of Enaptin encompasses 27,669 bp and predicts a 1014 kDa protein. The human Enaptin gene located on 6q23.1-25.3 spreads over 515 kb and gives rise to several splicing isoforms (Nesprin-1, Myne-1, Syne-1, CPG2). Northern blot analysis identified a >14 kb transcript and an additional transcript of 5.5 kb in brain. Using a polyclonal antibody against the ABD of Enaptin we detected a protein of approximately 400 kDa in tissues like brain and skeletal muscle. Further analysis showed that Enaptin is expressed in a wide range of tissues. Polyclonal antibodies generated against the C-terminus of Enaptin detected the protein at the nuclear envelope and in the cytosol of human fibroblasts. We showed that Enaptin is located in the outer nuclear membrane by selective permeabilisation of the plasma membrane with digitonin, furthermore its nuclear envelope localization was not affected by disruption of the actin cytoskeleton. Our studies also indicated that the nuclear envelope localization of Enaptin depended on lamin A/C. This is underlined by our findings in fibroblast cells from patients affected with laminopathies where we observed an altered distribution of Enaptin. With the N-terminal ABD domain and its C-terminal transmembrane domain, Enaptin has the potential to connect the nucleus to the actin cytoskeleton. Studies on Enaptin orthologues in lower eukaryotes proposed a role for these proteins in nuclear positioning and anchorage and in embryonic muscle development. Our myoblast differentiation studies showed an altered expression of Enaptin during differentiation. In order to reveal the functions of Enaptin and its link to human disease, we initiated a project for targeted disruption of Enaptin in the mouse.

    Item Type: Thesis (PhD thesis)
    Translated abstract:
    AbstractLanguage
    Zusammenfassung --------------------------------------------------------------------------- Enaptin ist ein neues F-Aktin bindendes Protein, das wir bei einer Suche nach neuartigen Proteinen der a-Aktinin Familie im Genom von Maus und Mensch identifiziert haben. Enaptin besitzt eine a-Aktinin-ähnliche Aktinbindedomäne am Aminoterminus, die von einem langen helikalen Bereich mit mehreren Spektrindomänen gefolgt wird. Am C-Terminus ist eine Transmembrandomäne lokalisiert, mit der Enaptin in der Kernmembran verankert werden kann. Zusammen mit NUANCE, das ebenfalls in unserer Gruppe beschrieben wurde, gehört Enaptin zu einer neuen Klasse von Proteinen, die potentiell das Aktinzytoskelett mit dem Zellkern verbinden. In dieser Arbeit wurde die cDNA von Enaptin assembliert. Der längste offene Leserahmen kodiert für eine 27.669 b lange mRNA und führt zu einem Protein von 1014 kDa. Das menschliche Enaptingen ist auf Chromosom 6 an der Position 6q23.1-25.3 lokalisiert und umfasst 515 kb. Für Enaptin sind die Spleissvarianten Nesprin-1, Myne-1, Syne-1 und CPG2 beschrieben worden. In Northernblots konnten wir in Gehirn Transkripte von mehr als 14 kb und 5.5 kb nachweisen; ein polyklonaler Antikörper, der gegen die Aktinbindedomäne von Enaptin erzeugt wurde, erkennt ein Protein von 400 kDa in Gehirn und Skelettmuskel. Polyklonale Antikörper, die gegen die C-terminale Region von Enaptin gerichtet sind, färben in Immunfluoreszenzanalysen die Kernmembran in humanen Fibroblasten. Für diese Lokalisation ist der C-terminale Bereich verantwortlich. Die Lokalisation an der Kernmembran wird aber auch von LaminA/C beeinflusst, da die Enaptinverteilung in Fibroblasten von Patienten verändert ist, die an Laminopathien leiden. Basierend auf Befunden, die für Enaptin-ähnliche Proteine in niederen Eukaryonten erzielt wurden, nehmen wir an, dass Enaptin eine Rolle bei der Zellkernverankerung und/oder Zellkernpositionierung besitzt und an Kernwanderungsprozessen in der Entwicklung beteiligt sein kann. Mit Hilfe von Mausmutanten soll diese Frage geklärt werden.German
    Creators:
    CreatorsEmail
    Abraham, Sabusabuchenakottu@yahoo.com
    URN: urn:nbn:de:hbz:38-12611
    Subjects: Chemistry and allied sciences
    Uncontrolled Keywords:
    KeywordsLanguage
    Enaptin, actin-binding protein, nuclear envelope, muscular dystrophyEnglish
    Faculty: Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät
    Divisions: Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät > Biochemie I
    Language: English
    Date: 2004
    Date Type: Completion
    Date of oral exam: 07 July 2004
    Full Text Status: Public
    Date Deposited: 27 Sep 2004 12:23:00
    Referee
    NameAcademic Title
    Noegel, Angelika A.Prof. Dr.
    URI: http://kups.ub.uni-koeln.de/id/eprint/1261

    Actions (login required)

    View Item