Universität zu Köln

Das diffus großzellige B-Zell-Lymphom (DLBCL) ist eines der häufigsten non-Hodgkin-Lymphome (NHL). Die Standardtherapie für DLBCL ist R-CHOP, ein Chemotherapie-Regime bestehend aus Cyclophosphamid, Hydroxydaunorubicin (Doxorubicin), Oncovin (Vincristin) und Prednison kombiniert mit Rituximab, einem monoklonalen Antikörper (mAB). Die meisten Patienten sprechen gut auf diese Erstlinientherapie an und zeigen Heilungsraten von 60 bis 70 %. Einige Patienten erleiden jedoch ein Rezidiv oder entwickeln eine refraktäre (R/R) Erkrankung. Die Standard-Zweitlinienbehandlung besteht aus einer Hochdosis-Chemotherapie, gefolgt von einer autologen Stammzelltransplantation (ASCT). Diese Therapieoption kommt jedoch nicht für alle Patienten und Patientinnen infrage und ist mit schweren Nebenwirkungen verbunden. Zielgerichtete Therapien haben die Behandlungsmöglichkeiten für Patienten und Patientinnen mit rezidivierender oder refraktärer Krankheit erheblich verändert. Zu diesen Therapien zählen T-Zellen mit chimären Antigenrezeptor (CAR), Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADC) und bispezifische Antikörper (bsAbs). Bislang sind zwei bsAbs, Epcoritamab und Glofitamab, von der Lebensmittel- und Arzneimittelbehörde der Vereinigten Staaten (FDA) für die Behandlung von R/R DLBCL zugelassen. Beide weisen eine gute Gesamtansprechrate und ein tolerables Sicherheitsprofil auf. Viele weitere bsAbs werden derzeit für die Behandlung von DLBCL und anderen malignen B-Zell-Erkrankungen entwickelt, um die Prognose für diese Patienten und Patientinnen zu verbessern. In dieser Arbeit wurden neue bsAbs entwickelt und ihre Fähigkeiten in vitro untersucht. Diese bsAbs zielen auf bestimmte Marker, sogenannte Cluster of Differentiation (CD). Die in dieser Arbeit entwickelten bsAbs binden mit einer Antigenbindungsstelle an CD19, einen häufigen B-Zell-Marker. Die andere Antigenbindungsstelle richtet sich gegen CD3, CD16 oder CD28, welche auf T-Zellen oder natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) zu finden sind. Für die präklinische Validierung dieser bsAbs wurden mehrere Experimente durchgeführt. Die Expression der bsAbs wurde durch Immunoblotting nachgewiesen. Die Bindungsfähigkeit der bsAbs wurde mittels Durchflusszytometrie überprüft. Dabei zeigte sich eine starke Bindung von CD3, CD16 und CD28 durch die jeweiligen bsAbs. Die Bindung von CD19 konnte mit dieser Methode jedoch nicht nachgewiesen werden. Die ersten Ko-Kultur-Experimente mit peripheren mononuklearen Blutzellen (PBMCs) und CD19-positiven Lymphomzellen zeigten eine erhöhte in vitro Toxizität bei Zugabe von bsAbs, die gegen CD3 und CD19 gerichtet sind. Zusammengefasst hat diese Arbeit den Grundstein für die weitere präklinische Validierung neuartiger bispezifischer Antikörper gelegt. Angefangen mit der Plasmid-Amplifikation für Transfektionen bis hin zur Etablierung von Luciferase-transduzierten CD19-positiven Lymphomzellen für Ko-Kultur-Experimente. Weitere Wiederholungen von Ko-Kultur- und Durchflusszytometrie-Experimente sind erforderlich, um die von den bispezifischen Antikörpern ausgelöste Lyse nachzuweisen. Dies würde die Funktionalität dieser bsAbs belegen und einen bedeutenden Schritt auf dem Gebiet der bispezifischen Antikörpertherapie darstellen.

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