Universität zu Köln

Siebers, Katrin (2026). Charakterisierung des Interaktoms verschiedener Spleißvarianten des Transkriptionsfaktors Wt1 durch stabile Integration in murine Podozyten in vitro. PhD thesis, Universität zu Köln.

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Abstract

Das Wilms-Tumor-Protein (Wt1) spielt als Transkriptionsfaktor eine tragende Rolle bei der Entwicklung des Urogenitalsystems und als Tumorsuppressor. Es reguliert die Expression zahlreicher Gene und steht vermutlich mit zahlreichen anderen Proteinen in Wechselwirkung. Wt1 existiert in vier Isoformen durch das Vorhandensein oder Fehlen von Exon 5 und den Aminosäuren KTS und wird hauptsächlich in den Nieren von Podozyten gebildet. Für diese Arbeit wurde ein neuer, modular aufgebauter Vektor mittels TALEN-mediierter Genom-Integration kloniert, der die zielgerichtete und effiziente Generierung stabiler Zelllinien ermöglicht. Durch sein Design kann er durch wenige Klonierungsschritte auf nahezu jedes Protein modifiziert werden und stellt damit ein vielseitiges Werkzeug dar. Für diese Arbeit wurden vier Podozyten-Zelllinien für die Überexpression der Wt1-Isoformen und eine Kontrolllinie mit RFP generiert und in verschiedenen Experimenten validiert. In dem anschließenden massenspektrometrischen Experiment konnten Daten für das Wt1-Interaktom erhoben werden. Dabei wurden unter anderem Spp1, Scel, Zo-1 und Pno1 als potenziell relevante Kandidaten identifiziert. Da klassische Signifikanzschwellen nicht erreicht wurden, wurde ein explorativer Cutoff gewählt und die Ergebnisse explorativ bewertet. Die Ergebnisse zeigen die Eignung des entwickelten Vektorsystems zur Generierung stabiler Zelllinien und liefern erste Hinweise auf potenziell isoformspezifische Unterschiede im Wt1-Interaktom. Die identifizierten Kandidaten stellen Ausgangspunkte für weiterführende funktionelle Untersuchungen zur Rolle von Wt1 in Podozyten dar.

Item Type:	Thesis (PhD thesis)
Creators:	Creators Email ORCID ORCID Put Code Siebers, Katrin siebersk1@gmail.com UNSPECIFIED UNSPECIFIED
URN:	urn:nbn:de:hbz:38-813233
Date:	26 February 2026
Language:	German
Faculty:	Faculty of Medicine
Divisions:	Faculty of Medicine > Innere Medizin > Klinik II für Innere Medizin - Nephrologie, Rheumatologie, Diabetologie und Allgemeine Innere Medizin
Subjects:	no entry
Uncontrolled Keywords:	Keywords Language Wt1, Podozyten, Wt1-Spleißisoformen, Interaktom, Massenspektrometrie, TALEN German
Date of oral exam:	26 February 2026
Referee:	Name Academic Title Kann, Martin Privatdozent Dr. med. Grüll, Henning Privatdozent Dr. med.
Refereed:	Yes
URI:	http://kups.ub.uni-koeln.de/id/eprint/81323