Universität zu Köln

Weiß, Miriam (2022). Untersuchungen zu veränderten Expressionsprofilen der serin-/argininreichen Spleißfaktoren 1 und 3 in murinen Lungenadenokarzinomen nach LSD1-Inhibierung: Eine Studie mithilfe der Laser-Mikrodissektion und nCounter-Technologie. PhD thesis, Universität zu Köln.

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Abstract

Lungenkrebs ist eine der häufigsten bösartigen Tumorerkrankungen mit schlechter Prognose trotz jahrelanger Forschung. Unter anderem in Lungenadenokarzinomen (LuAD) wird eine erhöhte Expression der lysinspezifischen Demethylase 1 beobachtet. LSD1 beeinflusst als epigenetischer Mediator viele zelluläre Prozesse. Der LSD1 Inhibitor HCI-2509 reprimiert auch die Expression transaktivierender Spleißfaktoren. Daher wurden die zentralen Spleißfaktoren SRSF1 und SRSF3 und deren konservierte Spleißvarianten in LuAD-repräsentativen, transgenen Mausmodellen nach KRAS G12V- oder EGFR L858R-induzierter Lungenadenokarzinogenese auf den Einfluss einer pharmakologischen und transgenen LSD1-Inhibierung untersucht. Aus formalinfixierten, paraffineingebetteten (FFPE) Gewebepräparaten wurde mittels Makro- und Laser-Mikrodissektion gezielt RNA gewonnen. Die Genexpressionsanalyse erfolgte mittels nCounter-Technologie mit Quantifizierung der Transkripte durch Hybridisierung fluoreszierender Sonden. Für die Spleißfaktoren konnte abhängig von der Mutation und der Transkriptvariante in den LuAD ein unterschiedliches Expressionsmuster festgestellt werden. So wurde der SRSF1 unter KRAS G12V Mutation unabhängig von der LSD1-Inhibierung signifikant herunterreguliert, während der SRSF1-Expressionsspiegel insgesamt in EGFR L858R-basierten LuAD unverändert war. Im Einklang mit den KRAS mutierten Tumoren lag der Anteil der SRSF1 Transkriptvariante mit zusätzlicher Exon 3-Sequenz vermindert vor. Beide LSD1- Inhibierungen zeigten hier keinen eindeutigen Effekt. Im Gegensatz zu KRAS G12V mutierten LuAD unterlag die SRSF3-Gesamtexpression in den LuAD mit EGFR-Treibermutation L858R einer Hochregulation. Dies bestätigt den vorbeschriebenen onkogenen Charakter des Faktors. Unter der LSD1-Inhibierung kommt es zu einem verminderten Anstieg der SRSF3-Expression in den EGFR L858R-LuAD. Während die Expression der Transkriptvariante, die aufgrund eines frühen Stop-Codons zu einer trunkierten inaktiven Peptidform führt, nicht unter dem Einfluss einer LSD1-Inhibierung stand, sprechen übereinstimmend mit in vitro-Daten der Arbeitsgruppe diese Daten dafür, dass eine LSD1-Inhibierung die Gesamtexpression von SRSF3 reguliert.

Item Type:	Thesis (PhD thesis)
Creators:	Creators Email ORCID ORCID Put Code Weiß, Miriam weissmir@web.de UNSPECIFIED UNSPECIFIED
URN:	urn:nbn:de:hbz:38-644512
Date:	2022
Language:	German
Faculty:	Faculty of Medicine
Divisions:	Faculty of Medicine > Pathologie und Neuropathologie > Institut für Pathologie
Subjects:	Natural sciences and mathematics Medical sciences Medicine
Uncontrolled Keywords:	Keywords Language Lungenkarzinom German LSD1-Inhibierung German Epigenetik German KRAS UNSPECIFIED EGFR UNSPECIFIED HCI-2509 UNSPECIFIED SRSF1 UNSPECIFIED SRSF3 UNSPECIFIED Splicing UNSPECIFIED nCounter Technologie UNSPECIFIED Laser-Mikrodissektion German LSD1 UNSPECIFIED NSCLC UNSPECIFIED Spleißfaktoren German onkogen UNSPECIFIED FFPE-Gewebe UNSPECIFIED
Date of oral exam:	20 June 2022
Referee:	Name Academic Title Odenthal, Margarete Professorin Dr. rer. nat. Nogová, Lucia Privatdozentin Dr. med.
Refereed:	Yes
URI:	http://kups.ub.uni-koeln.de/id/eprint/64451