Universität zu Köln

Hammels, Ina (2009). Biochemische und molekularbiologische Untersuchungen zum Sphingosin-Stoffwechsel in vitro und in Mausmutanten. PhD thesis, Universität zu Köln.

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Abstract

Die Serin Palmitoyl-CoA-Tranferase (spt) stellt das Schüsselenzym im Sphingolipidmetabolismus dar. Die von spt katalysierte Reaktion ist die Kondensation von Serin mit Palmitoyl-CoA unter Bildung von 3-Oxosphinganin. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein Konstrukt zur heterologen Expression von spt in HEK293 Zellen erstellt. Das Konstrukt wurde in der Arbeit zur näheren Charakterisierung der spt verwendet. Dafür wurden SPT-Aktivitätsmessungen an den HEK293 Zellen mit [U-14C]-Serin und [1-14C]-Palmitinsäure durchgeführt. Desweiteren wurden Veränderung des Lipidstoffwechsels untersucht. Dafür wurde ein in vivo-Assay mit [1-14C]-Palmitinsäure durchgeführt, durch den eine Zunahme des Glucocerebrosids beim spt-Klon im Vergleich zu den WT-Zellen festgestellt wurde. Veränderungen der Expression anderer Gene des Sphingolipidmetabolismus sind untersucht worden. Zusätzlich wurde nachgewiesen, daß eine Überexpression von spt keine Apoptose auslöst. Es wurde eine vergleichende Analyse des Katabolismus durch Verwendung der Enzyme Sphingosin-1-Phosphat Lyase und Sphingosinkinase durchgeführt. Zum besseren Verständnis der Bedeutung von spt, sollte eine induzierbare konditionelle spt defiziente Mausmutante generiert werden. Dafür wurde ein replacement Vektor homolog rekombiniert in embryonale Stammzellen eingebracht. Durch Vorkern-Injektion sollte zudem eine leberspezifisch Cre exprimierende Mauslinie generiert werden. Der verwendete Vektor entsprach dem �tet on� System, was eine Induktion von Cre nach Doxicyclin-Gabe ermöglichen sollte.

Item Type:	Thesis (PhD thesis)
Translated title:	Title Language Biochemical and molecularbiological research into sphingosin metabolism in vitro and in mouse mutants English
Translated abstract:	Abstract Language Serine palmitoyltransferase (spt) is the key enzyme of sphingolipid metabolism. Spt catalyses the condensation of serine with palmitoyl CoA to form 3-oxosphinganine, which is further transformed into shingosine containing ceramides In this study a vector construct was established for heterologous expression in HEK293 cells. The construct was used for the characterisation of SPT-activity. For quantification radioactive labeled [U-14C]-serine and [1-14C]-palmitic acid were used in HEK293 cells. Studies on sphingolipid metabolism were carried out in in vivo assay-systems with [1-14C]-palmitic acid. Changes in the expression of other genes from the sphingolipid metabolism have been tested. Importantly, no apoptosis could be detected in the clone overexpressing spt. A comparative analysis for the catabolic enzymes sphingosine-1-phosphate lyase and sphingosinkinase was made. For the generation of a conditional spt knock out mouse a replacement vector was constructed for homologous recombination in ES-cell. A transgenic mouseline, which directs cre-recombinase expression liverspecifically, was generated by pronuclear injection. This vector uses the �tet on� system, which is inducible by doxycycline. English
Creators:	Creators Email ORCID ORCID Put Code Hammels, Ina ihammels@uni-koeln.de UNSPECIFIED UNSPECIFIED
URN:	urn:nbn:de:hbz:38-27502
Date:	2009
Language:	German
Faculty:	Faculty of Mathematics and Natural Sciences
Divisions:	Ehemalige Fakultäten, Institute, Seminare > Faculty of Mathematics and Natural Sciences > Laboratorium für Molekulare Neuroforschung
Subjects:	Life sciences
Uncontrolled Keywords:	Keywords Language Sphingolipide, spt, sphk, spl German sphingolipids, spt, sphk, spl English
Date of oral exam:	23 April 2009
Referee:	Name Academic Title Stoffel, Wilhelm Prof. Dr.
Refereed:	Yes
URI:	http://kups.ub.uni-koeln.de/id/eprint/2750